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mRNA-seq (NGS) com genoma de referência

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mRNA-seq (NGS) com genoma de referência

RNA-seq é uma ferramenta padrão nas ciências da vida e das culturas, preenchendo a lacuna entre genomas e proteomas. A sua força reside na descoberta de novas transcrições e na quantificação da sua expressão num único ensaio. É amplamente utilizado para estudos transcriptômicos comparativos, lançando luz sobre genes relacionados a várias características ou fenótipos, como comparar mutantes com tipos selvagens ou revelar a expressão gênica sob condições específicas. O APP BMKCloud mRNA (Referência) integra quantificação de expressão, análise de expressão diferencial (DEG) e análises de estrutura de sequência no pipeline de bioinformática mRNA-seq (NGS) e combina os pontos fortes de software semelhante, garantindo conveniência e facilidade de uso. Os usuários podem enviar seus dados de RNA-seq para a nuvem, onde o aplicativo oferece uma solução de análise bioinformática abrangente e completa. Além disso, prioriza a experiência do cliente, oferecendo operações personalizadas e adaptadas às necessidades específicas dos usuários. Os usuários podem definir parâmetros e enviar a missão do pipeline por conta própria, verificar o relatório interativo, visualizar dados/diagramas e concluir a mineração de dados, como: seleção do gene alvo, agrupamento funcional, diagramação, etc.

Resultados de demonstração
Mineração de dados
Requisito de importação
Análise principal
Referência
Resultados de demonstração

Mineração de dados

Requisito de importação

Plataforma:Illumina, MG
Estratégia:RNA-Seq
Disposição: Dados parados e limpos.
Tipo de biblioteca:fr-unstrand, fr-firststrand ou fr-secondstrand
Comprimento de leitura:150 pb
Tipo de arquivo:*.fastq, *.fq, *.fastq.gz ou *.fq.gz. O sistema iráemparelhar automaticamente os arquivos .fastq de acordo com seus nomes de arquivo,por exemplo, *_1.fastq emparelhado com *._2.fastq.
Número de amostras:Não há restrições quanto ao númerode amostras, mas o tempo de análise aumentará à medida que o número deamostras crescem.
Quantidade de dados recomendada:6G por amostra

Análise principal
As principais ferramentas de análise e bioinformática do mRNA-seq (Referência)pipeline é o seguinte:
1. Controle de qualidade de dados brutos:
•Remoção de sequências de baixa qualidade, sequências adaptadoras,etc;
•Ferramentas: pipeline desenvolvido internamente;
2. Alinhamento de dados a um genoma de referência:
•Alinhar leituras com um algoritmo com reconhecimento de emenda em relação aogenoma de referência.
•Ferramentas:HISAT2, ferramentas
3. Análise da qualidade da biblioteca:
•Análise de comprimento de inserto, análise de saturação de sequência, etc;
•Ferramentas:ferramentas;
4. Análise da estrutura sequencial:
•Análise de splicing alternativo, otimização da estrutura genética,previsão de novos genes, etc;
•Ferramentas:Gravata de corda, gffcomparar, GATK,DIAMANTE, InterProScan, eHMMER.
5. Análise de expressão diferencial:
• Triagem DEG, análise de co-relacionamento, funcionalenriquecimento;
Vários resultados de visualização;
RcomSEGseq, DESeq2, ggplot2, DEXSeq
Referência
1. Kim, Daehwan et al. “Alinhamento do genoma baseado em gráficos egenotipagem com HISAT2 e genótipo HISAT.”NaturezaBiotecnologia37 (2019): 907-915.
2. McKenna, Aaron et al. “O kit de ferramentas de análise do genoma: umEstrutura MapReduce para análise de DNA de próxima geraçãodados de sequenciamento.Pesquisa do genoma209 (2010): 1297-303.
3. Li, Heng et al. “O formato de alinhamento/mapa de sequência eFerramentas SAM.”Bioinformática25 (2009): 2078-2079.
4. Perțea, Mihaela et al. “StringTie permite melhoriasreconstrução de um transcriptoma a partir de leituras de RNA-seq.”NaturezaBiotecnologia33 (2015): 290-295.
5. Amor, Michael I. et al. “Estimativa moderada de mudança de dobra edispersão para dados de RNA-seq com DESeq2.”GenomaBiologia15 (2014): n. pág.
6. Eddy, Sean R.. “Pesquisas HMM de perfis acelerados”.PLoS Biologia Computacional7 (2011): n. pág.

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