-
Single- nuclei RNA Sequencing
ဆဲလ်တစ်ခုတည်း ဖမ်းယူခြင်းနှင့် စိတ်ကြိုက်စာကြည့်တိုက်တည်ဆောက်မှုနည်းပညာများ ဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်လာမှုနှင့်အတူ မြင့်မားသော ဆင့်ကဲဆင့်ကဲလုပ်ဆောင်ခြင်းနှင့်အတူ ဆဲလ်အဆင့်တွင် မျိုးဗီဇဖော်ပြမှုလေ့လာမှုများကို တော်လှန်ပြောင်းလဲခဲ့သည်။ ဤအောင်မြင်မှုသည် ဆဲလ်အားလုံးအပေါ် ပျမ်းမျှမျိုးရိုးဗီဇဖော်ပြမှုနှင့် ဆက်စပ်နေသော ကန့်သတ်ချက်များကို ကျော်လွှားပြီး ဤလူဦးရေများအတွင်း စစ်မှန်သော မျိုးရိုးဗီဇကို ထိန်းသိမ်းထားနိုင်စေမည့် နက်နဲပြီး ကျယ်ကျယ်ပြန့်ပြန့် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှု ပြုလုပ်နိုင်စေပါသည်။ single-cell RNA sequencing (scRNA-seq) တွင် မငြင်းနိုင်သော အားသာချက်များ ရှိသော်လည်း၊ ဆဲလ်တစ်ခုတည်း ဆိုင်းထိန်းစနစ် ဖန်တီးမှုသည် ခက်ခဲပြီး လတ်ဆတ်သော နမူနာများ လိုအပ်သည့် အချို့သော တစ်ရှူးများတွင် စိန်ခေါ်မှုများနှင့် ကြုံတွေ့ရသည်။ BMKGene တွင်၊ ကျွန်ုပ်တို့သည် ခေတ်မီသော 10X Genomics Chromium နည်းပညာကို အသုံးပြု၍ single-nucleus RNA sequencing (snRNA-seq) ကို ပေးဆောင်ခြင်းဖြင့် ဤအခက်အခဲကို ဖြေရှင်းပေးပါသည်။ ဤချဉ်းကပ်မှုသည် ဆဲလ်တစ်ခုတည်းအဆင့်တွင် စာသားမှတ်တမ်း ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာရန် ပြင်ဆင်နိုင်သော နမူနာများ၏ ရောင်စဉ်ကို ကျယ်ပြန့်စေသည်။
နျူကလိယ၏အထီးကျန်မှုကို ဆန်းသစ်တီထွင်ထားသော 10X Genomics Chromium ချစ်ပ်ဖြင့် ပြီးမြောက်အောင်မြင်ပြီး ရှစ်လိုင်းခွဲမိုက်ခရိုဖလူးဒစ်စနစ်ပါ၀င်သည်။ ဤစနစ်အတွင်း၊ ဘားကုဒ်များ၊ primers၊ အင်ဇိုင်းများနှင့် နျူကလိယတစ်ခုစီပါ၀င်သော ဂျယ်ပုတီးစေ့များကို နာနိုလီတာအရွယ် အဆီအစက်များတွင် ဖုံးအုပ်ထားပြီး Gel Bead-in-Emulsion (GEM) အဖြစ်ဖွဲ့စည်းထားသည်။ GEM ဖွဲ့စည်းပြီးနောက်၊ ဆဲလ် lysis နှင့် ဘားကုဒ်ထုတ်လွှတ်မှုသည် GEM တစ်ခုစီအတွင်း ဖြစ်ပေါ်သည်။ နောက်ပိုင်းတွင်၊ mRNA မော်လီကျူးများသည် 10X ဘားကုဒ်များနှင့် သီးသန့် Molecular Identifiers (UMIs) တို့ကို ပေါင်းစပ်ပြီး cDNAs သို့ ပြောင်းပြန်ကူးယူခြင်းကို လုပ်ဆောင်သည်။ ထို့နောက် အဆိုပါ cDNA များသည် ဆဲလ်တစ်ခုတည်းအဆင့်ရှိ မျိုးရိုးဗီဇဖော်ပြမှုပရိုဖိုင်များကို ခိုင်မာပြီး ကျယ်ကျယ်ပြန့်ပြန့်ရှာဖွေရေးတွင် အထောက်အကူဖြစ်စေသော စံချိန်စံညွှန်းစာကြည့်တိုက်တည်ဆောက်မှုတွင် ပေါင်းစပ်ထားသည်။
ပလပ်ဖောင်း- 10× Genomics Chromium နှင့် Illumina NovaSeq ပလပ်ဖောင်း
-
10x Genomics Visium Spatial စာသားမှတ်တမ်း
Spatial transcriptomics သည် သုတေသီများအား ၎င်းတို့၏ spatial context ကို ထိန်းသိမ်းထားစဉ် တစ်ရှူးများအတွင်း မျိုးဗီဇဖော်ပြမှုပုံစံများကို စုံစမ်းစစ်ဆေးရန် ခွင့်ပြုသည့် နောက်ဆုံးပေါ်နည်းပညာတစ်ခုဖြစ်သည်။ ဤဒိုမိန်းရှိ အားကောင်းသည့် ပလပ်ဖောင်းတစ်ခုသည် Illumina စီစစ်ခြင်းနှင့် 10x Genomics Visium ဖြစ်သည်။ 10X Visium ၏ နိယာမသည် တစ်ရှူးအပိုင်းများ ထားရှိရာ သတ်မှတ်ထားသော ဖမ်းယူဧရိယာပါသော အထူးပြု ချစ်ပ်ပေါ်တွင် တည်ရှိသည်။ ဤဖမ်းယူမှုဧရိယာတွင် တစ်ရှူးအတွင်း ထူးခြားသော အာကာသတည်နေရာတစ်ခုစီနှင့် သက်ဆိုင်သည့် ဘားကုဒ်လုပ်ထားသော အစက်အပြောက်များ ပါဝင်ပါသည်။ ထို့နောက် တစ်ရှူးမှ ဖမ်းယူထားသော RNA မော်လီကျူးများကို ပြောင်းပြန် ကူးယူခြင်း လုပ်ငန်းစဉ်အတွင်း ထူးခြားသော မော်လီကျူး အမှတ်အသားများ (UMIs) ဖြင့် တံဆိပ်တပ်ထားသည်။ ဤဘားကုဒ်လုပ်ထားသော အစက်အပြောက်များနှင့် UMI များသည် ဆဲလ်တစ်ခုတည်းရှိ ကြည်လင်ပြတ်သားမှုတွင် မျိုးရိုးဗီဇဖော်ပြမှု၏ တိကျသော spatial mapping နှင့် quantification တို့ကို လုပ်ဆောင်ပေးပါသည်။ နေရာဒေသအလိုက် ဘားကုဒ်လုပ်ထားသော နမူနာများနှင့် UMI များ ပေါင်းစပ်ခြင်းသည် ထုတ်လုပ်လိုက်သော ဒေတာများ၏ တိကျမှုနှင့် တိကျမှုကို သေချာစေသည်။ ဤ Spatial Transcriptomics နည်းပညာကို အသုံးပြုခြင်းဖြင့် သုတေသီများသည် ကင်ဆာဗေဒ၊ အာရုံကြောသိပ္ပံ၊ ဖွံ့ဖြိုးမှုဆိုင်ရာ ဇီဝဗေဒဆိုင်ရာ ဇီဝဗေဒဆိုင်ရာ ဇီဝဗေဒဆိုင်ရာ နယ်ပယ်ပေါင်းစုံမှ ဇီဝဗေဒဆိုင်ရာ ယန္တရားများအကြောင်း တန်ဖိုးမဖြတ်နိုင်သော ထိုးထွင်းသိမြင်မှုများကို ပေးစွမ်းနိုင်သည် နှင့် ရုက္ခဗေဒလေ့လာမှုများ။
ပလပ်ဖောင်း- 10X Genomics Visium နှင့် Illumina NovaSeq
-
အရှည်အပြည့် mRNA Sequencing-Nanopore
NGS-based mRNA sequencing သည် မျိုးရိုးဗီဇဖော်ပြမှုကို တိုင်းတာရန်အတွက် စွယ်စုံသုံးကိရိယာတစ်ခုဖြစ်သော်လည်း တိုတိုဖတ်ခြင်းအပေါ် မှီခိုအားထားမှုသည် ရှုပ်ထွေးသော အသွင်ပြောင်းခြင်းဆိုင်ရာ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုတွင် ၎င်း၏ထိရောက်မှုကို ကန့်သတ်ထားသည်။ တစ်ဖက်တွင်၊ နာနိုပရီ စီစစ်ခြင်းတွင် အရှည်လျားဖတ်နည်းပညာကို အသုံးပြုပြီး mRNA စာသားမှတ်တမ်းများကို စီစီခြင်းကို ပံ့ပိုးပေးသည်။ ဤချဉ်းကပ်မှုသည် အစားထိုးပေါင်းစပ်ခြင်း၊ မျိုးဗီဇပေါင်းစပ်မှုများ၊ poly-adenylation နှင့် mRNA isoforms များ၏ အရေအတွက်ကို ကျယ်ကျယ်ပြန့်ပြန့်ရှာဖွေရန် ကူညီပေးသည်။
Nanopore sequencing၊ nanopore single-molecule real-time လျှပ်စစ်အချက်ပြမှုများအပေါ် မှီခိုသည့်နည်းလမ်းသည် အချိန်နှင့်တပြေးညီ ရလဒ်များကို ပေးပါသည်။ မော်တာပရိုတိန်းများဖြင့် လမ်းညွှန်ထားသော၊ ကြိုးနှစ်ထပ် DNA သည် ဇီဝဖလင်တွင် ထည့်သွင်းထားသော နာနိုပရိုတင်းများနှင့် ချိတ်တွဲကာ ဗို့အားကွာခြားမှုအောက်တွင် နာနိုပရီချန်နယ်ကို ဖြတ်သွားသည့်အခါ ပြေလျော့သွားသည်။ DNA ကြိုးမျှင်ပေါ်ရှိ မတူညီသောအခြေခံများမှထုတ်ပေးသော ထူးခြားသောလျှပ်စစ်အချက်ပြမှုများကို အချိန်နှင့်တပြေးညီခွဲခြားသိရှိနိုင်ပြီး တိကျပြီး စဉ်ဆက်မပြတ် နျူကလီးအိုတိုက်စီစီခြင်းကို လွယ်ကူချောမွေ့စေသည်။ ဤဆန်းသစ်တီထွင်သောချဉ်းကပ်မှုသည် တိုတောင်းသောစာဖတ်ခြင်းကန့်သတ်ချက်များကိုကျော်လွှားပြီး ရှုပ်ထွေးသော အသွင်ပြောင်းလေ့လာမှုများအပါအဝင် ရှုပ်ထွေးသောမျိုးရိုးဗီဇခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအတွက် တက်ကြွသောပလပ်ဖောင်းတစ်ခုကို ပံ့ပိုးပေးပါသည်။
ပလပ်ဖောင်း- Nanopore PromethION 48
-
အစအဆုံး mRNA စီစစ်ခြင်း -PacBio
NGS-based mRNA sequencing သည် gene expression ကို quantify လုပ်ရန် စွယ်စုံသုံးကိရိယာတစ်ခုဖြစ်သော်လည်း၊ တိုတောင်းသော reads များအပေါ် မှီခိုအားထားမှုသည် ရှုပ်ထွေးသော transcriptomic ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုတွင် ၎င်း၏အသုံးပြုမှုကို ကန့်သတ်ထားသည်။ အခြားတစ်ဖက်တွင်၊ PacBio sequencing (Iso-Seq) သည် အရှည်လျားဖတ်ထားသော နည်းပညာကို အသုံးပြုထားပြီး mRNA စာသားမှတ်တမ်းများကို စီစီခြင်းကို လုပ်ဆောင်နိုင်စေပါသည်။ ဤချဉ်းကပ်မှုသည် အစားထိုးပေါင်းစပ်ခြင်း၊ မျိုးရိုးဗီဇပေါင်းစပ်ခြင်းနှင့် poly-adenylation တို့ကို ကျယ်ကျယ်ပြန့်ပြန့်ရှာဖွေရန် ကူညီပေးသည်။ သို့သော်၊ ဒေတာပမာဏများစွာလိုအပ်သောကြောင့် မျိုးရိုးဗီဇဖော်ပြမှုပမာဏအတွက် အခြားရွေးချယ်စရာများရှိပါသည်။ PacBio sequencing နည်းပညာသည် single-molecule၊ real-time (SMRT) sequencing ပေါ်တွင် မူတည်ပြီး အစအဆုံး mRNA စာသားမှတ်တမ်းများကို ဖမ်းယူရာတွင် ထူးခြားသောအားသာချက်ကိုပေးစွမ်းသည်။ ဤဆန်းသစ်သောချဉ်းကပ်မှုတွင် စီတန်းစဉ်အတွင်း DNA polymerase လုပ်ဆောင်ချက်ကို အချိန်နှင့်တစ်ပြေးညီ ကြည့်ရှုနိုင်စေရန် သုညမုဒ်လှိုင်းလမ်းညွှန်များ (ZMWs) နှင့် microfabricated ရေတွင်းများကို အသုံးပြုခြင်း ပါဝင်သည်။ ဤ ZMWs အတွင်းတွင်၊ PacBio ၏ DNA polymerase သည် ပေါင်းစပ် DNA ကြိုးမျှင်ကို ပေါင်းစပ်ပြီး mRNA မှတ်တမ်းများ တစ်ခုလုံးကို ရှည်လျားသော ဖတ်ရှုမှုကို ဖန်တီးပေးသည်။ Circular Consensus sequencing (CCS) မုဒ်တွင် PacBio လုပ်ဆောင်ချက်သည် တူညီသော မော်လီကျူးကို ထပ်ခါတလဲလဲ စီစစ်ခြင်းဖြင့် တိကျမှုကို မြှင့်တင်ပေးပါသည်။ ထုတ်လုပ်လိုက်သော HiFi ဖတ်များသည် NGS နှင့် နှိုင်းယှဉ်နိုင်သော တိကျမှုရှိပြီး ရှုပ်ထွေးသော စာသားမှတ်တမ်းအင်္ဂါရပ်များကို ကျယ်ကျယ်ပြန့်ပြန့်နှင့် ယုံကြည်စိတ်ချရသော ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုတွင် အထောက်အကူပြုပါသည်။
ပလပ်ဖောင်း- PacBio Sequel II; PacBio Revio
-
Eukaryotic mRNA Sequencing-NGS
mRNA sequencing၊ စွယ်စုံရနည်းပညာတစ်ခုသည် ဆဲလ်အတွင်းရှိ mRNA မှတ်တမ်းများအားလုံးကို တိကျသောအခြေအနေများအောက်တွင် ကျယ်ကျယ်ပြန့်ပြန့်ဖော်ပြမှုကို အားကောင်းစေသည်။ ၎င်း၏ကျယ်ပြန့်သောအသုံးချပရိုဂရမ်များနှင့်အတူ၊ ဤနောက်ဆုံးပေါ်ကိရိယာသည် ရှုပ်ထွေးပွေလီသောဗီဇဖော်ပြချက်ပရိုဖိုင်များ၊ မျိုးရိုးဗီဇဖွဲ့စည်းပုံများနှင့် ကွဲပြားသောဇီဝဖြစ်စဉ်များနှင့်ဆက်စပ်နေသော မော်လီကျူးယန္တရားများကို ထုတ်ဖော်ပြသပါသည်။ အခြေခံသုတေသန၊ ဆေးခန်းပြခြင်းနှင့် ဆေးဝါးဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှုတွင် ကျယ်ကျယ်ပြန့်ပြန့် လက်ခံကျင့်သုံးသော mRNA သည် ဆယ်လူလာဒိုင်းနမစ်များနှင့် မျိုးရိုးဗီဇဆိုင်ရာ စည်းမျဥ်းများ၏ ရှုပ်ထွေးပွေလီသော ထိုးထွင်းသိမြင်မှုကို ပေးစွမ်းပြီး နယ်ပယ်အသီးသီးတွင် ၎င်း၏အလားအလာအကြောင်း သိချင်စိတ်ကို ဖြစ်ပေါ်စေပါသည်။
ပလပ်ဖောင်း- Illumina NovaSeq X; DNBSEQ-T7
-
အကိုးအကားမဟုတ်သော mRNA Sequencing-NGS
mRNA sequencing သည် သီးခြားအခြေအနေများအောက်တွင် ဆဲလ်အတွင်းရှိ mRNA မှတ်တမ်းများအားလုံးကို ကျယ်ကျယ်ပြန့်ပြန့် ပရိုဖိုင်ပြုလုပ်ခြင်းကို အားကောင်းစေသည်။ ဤခေတ်မီနည်းပညာသည် အစွမ်းထက်သောကိရိယာတစ်ခုဖြစ်ပြီး ရှုပ်ထွေးရှုပ်ထွေးသော ဗီဇဖော်ပြချက်ပရိုဖိုင်များ၊ မျိုးရိုးဗီဇဖွဲ့စည်းပုံများနှင့် ကွဲပြားသောဇီဝဖြစ်စဉ်များနှင့်ဆက်စပ်နေသော မော်လီကျူးယန္တရားများကို ထုတ်ဖော်ပြသပေးပါသည်။ အခြေခံသုတေသန၊ လက်တွေ့ရောဂါရှာဖွေရေးနှင့် ဆေးဝါးဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှုတွင် ကျယ်ကျယ်ပြန့်ပြန့် လက်ခံကျင့်သုံးသော mRNA သည် ဆယ်လူလာဒိုင်းနမစ်နှင့် မျိုးရိုးဗီဇဆိုင်ရာ စည်းမျဥ်းများဆိုင်ရာ ရှုပ်ထွေးနက်နဲသော ထိုးထွင်းဉာဏ်ကို ပေးပါသည်။
ပလပ်ဖောင်း- Illumina NovaSeq X; DNBSEQ-T7
-
Long Non-coding Sequencing-Illumina
ရှည်လျားသော coding မဟုတ်သော RNAs (lncRNAs) သည် အနည်းငယ်မျှသာ ကုဒ်လုပ်နိုင်သော အလားအလာရှိသော နူကလီးအိုတဒ် 200 ထက် ပိုရှည်ပြီး ကုဒ်မဟုတ်သော RNA အတွင်းရှိ အဓိကဒြပ်စင်များဖြစ်သည်။ နျူကလီးယပ်စ်နှင့် ဆိုက်တိုပလပ်စမ်များတွင်တွေ့ရှိရသည်၊ ဤ RNA များသည် ဆဲလ်လူလာနှင့် မော်လီကျူးဖြစ်စဉ်များကိုပုံဖော်ရာတွင် ၎င်းတို့၏အရေးပါမှုကို အလေးပေးဖော်ပြသည့် epigenetic၊ transcriptional နှင့် post-transcriptional regulation တွင် အရေးပါသောအခန်းကဏ္ဍမှပါဝင်သည်။ LncRNA sequencing သည် ဆဲလ်ကွဲပြားမှု၊ Ontogenesis နှင့် လူသားရောဂါများအတွက် အစွမ်းထက်သောကိရိယာတစ်ခုဖြစ်သည်။
ပလပ်ဖောင်း- Illumina NovaSeq
-
အသေးစား RNA Sequencing-Illumina
သေးငယ်သော RNA (sRNA) မော်လီကျူးများ၊ microRNAs (miRNAs)၊ အသေးစား interfering RNAs (siRNAs) နှင့် piwi-interacting RNAs (piRNAs) တို့ ပါဝင်သည်။ ယင်းတို့အထဲတွင် miRNAs သည် 18-25 nucleotides ရှည်လျားသော ဆဲလ်လူလာ လုပ်ငန်းစဉ်များတွင် ၎င်းတို့၏ အဓိက ထိန်းကျောင်းမှုအခန်းကဏ္ဍအတွက် အထူးမှတ်သားဖွယ် မှတ်သားဖွယ်ကောင်းသည်။ တစ်ရှူး သီးသန့်နှင့် အဆင့်အလိုက် ဖော်ပြမှုပုံစံများဖြင့် miRNA များသည် မတူညီသောမျိုးစိတ်များတစ်လျှောက် မြင့်မားသောထိန်းသိမ်းမှုကို ပြသသည်။
ပလပ်ဖောင်း- Illumina NovaSeq
-
CircRNA Sequencing-Illumina
Circular RNA sequencing (circRNA-seq) သည် ကာနိုမဟုတ်သော ပေါင်းစပ်ဖြစ်ရပ်များကြောင့် ဤ RNA ကို တိုးမြှင့်တည်ငြိမ်မှုပေးစွမ်းနိုင်သော အပိတ်ကွင်းများဖွဲ့စည်းသည့် RNA မော်လီကျူးများဖြစ်သော စက်ဝိုင်း RNA များကို ပရိုဖိုင်းနှင့် ပိုင်းခြားစိတ်ဖြာရန်ဖြစ်သည်။ အချို့သော circRNA များသည် microRNA ရေမြှုပ်များအဖြစ် လုပ်ဆောင်ရန်၊ microRNA များကို စုဆောင်းပြီး ၎င်းတို့၏ပစ်မှတ် mRNAs များကို ထိန်းညှိခြင်းမှ တားဆီးထားသော်လည်း၊ အခြားသော circRNA များသည် ပရိုတင်းများနှင့် ဓါတ်ပြုမှုများ၊ မျိုးရိုးဗီဇဖော်ပြမှုကို ပြုပြင်ခြင်း သို့မဟုတ် ဆဲလ်လူလာလုပ်ငန်းစဉ်များတွင် အခန်းကဏ္ဍများပါရှိသည်။ circRNA စကားအသုံးအနှုန်းခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုသည် ဤမော်လီကျူးများ၏ စည်းမျဉ်းဆိုင်ရာအခန်းကဏ္ဍများနှင့် ဆဲလ်လူလာလုပ်ငန်းစဉ်များ၊ ဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှုအဆင့်များနှင့် ရောဂါအခြေအနေအမျိုးမျိုးတွင် ၎င်းတို့၏အရေးပါမှုကို ထိုးထွင်းသိမြင်စေကာ မျိုးရိုးဗီဇဖော်ပြမှုတွင် RNA စည်းမျဥ်း၏ ရှုပ်ထွေးမှုကို နက်နဲစွာနားလည်စေရန် ပံ့ပိုးပေးပါသည်။
-
စာသားမှတ်တမ်းတစ်ခုလုံးကို စီစစ်ခြင်း – Illumina
စာသားမှတ်တမ်း ပေါင်းစပ်ခြင်းတစ်ခုလုံးသည် မတူကွဲပြားသော RNA မော်လီကျူးများကို ပရိုဖိုင်ပြုလုပ်ရန် ကျယ်ကျယ်ပြန့်ပြန့် ချဉ်းကပ်မှုတစ်ခုဖြစ်ပြီး coding (mRNA) နှင့် non-coding RNAs (lncRNA၊ circRNA နှင့် miRNA) တို့ကို လွှမ်းခြုံထားသည်။ ဤနည်းပညာသည် သတ်မှတ်ထားသောအခိုက်အတန့်တွင် ဆဲလ်များ၏ စာသားမှတ်တမ်းတစ်ခုလုံးကို ဖမ်းယူနိုင်ပြီး ဆယ်လူလာဖြစ်စဉ်များကို အလုံးစုံနားလည်နိုင်စေပါသည်။ “total RNA sequencing” ဟုလည်းသိကြပြီး၊ ၎င်းသည် ယှဉ်ပြိုင်နေသော endogenous RNA (ceRNA) နှင့် ပူးတွဲ RNA ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းကဲ့သို့သော အတွင်းကျကျခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုကို ပံ့ပိုးပေးသည့် ရှုပ်ထွေးသော စည်းမျဉ်းစည်းကမ်းကွန်ရက်များကို ထုတ်ဖော်ပြသရန် ရည်ရွယ်သည်။ အထူးသဖြင့် circRNA-miRNA-mRNA-based ceRNA အပြန်အလှန်တုံ့ပြန်မှုများပါ၀င်သည့် စည်းမျဉ်းကွန်ရက်များကို ခွဲထုတ်ရာတွင် လုပ်ဆောင်ချက်ဆိုင်ရာ လက္ခဏာအသွင်ဆောင်ခြင်းဆီသို့ ကနဦးခြေလှမ်းကို အမှတ်အသားပြုပါသည်။
