Takagi et al., Plant Journal, 2013 година
● Точна локализација: Мешање на рефлекси со 30+30 до 200+200 лица за да се минимизира бучавата во позадина; Не-синонимни предвидувања на кандидатски регион засновани на мутатити.
● Сеопфатна анализа: Длабоко анотација на функцијата на гените на кандидатот, вклучувајќи NR, SwissProt, GO, KEGG, COG, KOG, итн.
● Побрзо време на пресврт: Брза локализација на гени во рок од 45 работни дена.
● Огромно искуство: BMK придонесе во илјадници карактеристики на локализација, опфаќајќи различни видови како земјоделски култури, водни производи, шума, цвеќиња, овошје, итн.
Население:
Одделување на потомството на родителите со спротивставени фенотипови.
на пр. F2 потомство, засилување (п.н.е.), рекомбинантна влезна линија (RIL)
Мешање базен
За квалитативни црти: 30 до 50 лица (минимум 20)/најголемиот дел
За квантитативна тратис: Топ 5% до 10% лица со екстремни фенотипови кај целата популација (минимум 30+30).
Препорачана длабочина на секвенционирање
Најмалку 20x/родител и 1x/потомство индивидуа (на пр. За мешање на базен од 30+30 индивидуа, длабочина на секвенционирање ќе биде 30x по најголемиот дел)
● Ревцетирање на целиот геном
● Обработка на податоци
● Повикување на SNP/INDEL
● Скрининг на регионот на кандидатот
● Анотација на функцијата на генот на кандидатот
Нуклеотиди:
примерок од gDNA | Примерок од ткиво |
Концентрација: ≥ 30 ng/μl | Растенија: 1-2 g |
Количина: ≥2 μg (Волм ≥15 μl) | Animивотни: 0,5-1 Г. |
Чистота: OD260/280 = 1,6-2.5 | Цела крв: 1,5 ml |
1. База за анализа на асоцијација на растојание од Евклид (ЕД) за да се идентификува регионот на кандидатот. На следната слика
Х-оска: број на хромозом; Секоја точка претставува ED вредност на SNP. Црната линија одговара на вклопената вредност на ЕД. Повисоката вредност на ЕД укажува на позначајна поврзаност помеѓу страницата и фенотипот. Црвената цртичка претставува праг на значајна асоцијација.
2. Анализата на асоцијација без SNP-индекс заснована на SNP
Х-оска: број на хромозом; Секоја точка претставува вредност на SNP-индекс. Црната линија се залага за вградена вредност на SNP-индекс. Колку е поголема вредноста, толку е позначајно здружението.
Случај на БМК
Квантитативниот локус на карактеристиките на карактеристиките на големите ефекти FNL7.1 кодира доцна ембриогенеза изобилство протеини поврзани со должина на вратот на вратот во краставица
Објавено: Весник на растителни биотехнологија, 2020 година
Стратегија за секвенцирање:
Родители (Jin5-508, YN): Целиот геном резиденција за 34 × и 20.
ДНК базени (50 долги вратови и 50 кратки вратови): Резервирање за 61 × и 52
Клучни резултати
Во оваа студија, сегрегирањето на населението (F2 и F2: 3) беше генерирано со преминување на линија со долги врата од краставици Jin5-508 и yn со краток врат. Два ДНК базени беа изградени од 50 екстремни лица со долг врат и 50 екстремни лица со кратки врати. Голем ефект QTL беше идентификуван на CHR07 со анализа на BSA и традиционално мапирање на QTL. Кандидатскиот регион беше дополнително намален со фино мапирање, квантификација на изразување на гени и трансгенски експерименти, што откри клучен ген во контролата на должината на вратот, CSFNL7.1. Покрај тоа, се покажа дека полиморфизмот во CSFNL7.1 промоторниот регион е поврзан со соодветниот израз. Понатамошната филогенетска анализа сугерираше дека локусот FNL7.1 веројатно ќе потекнува од Индија.
![]() QTL-мапирање во анализата на БСА за да се идентификува кандидатскиот регион поврзан со должината на вратот на краставицата | ![]() Профилите на леб од краставица со должина на вратот QTL идентификувани на CHR07 |
Xu, X., et al. „Квантитативната локус на карактеристиките на карактеристиките на карактеристиките FNL7.1 кодира доцна ембриогенеза во изобилство протеини поврзани со должина на вратот на вратот во краставица“. Plant Biotechnology Journal 18.7 (2020).