● Pêvajoya nimûneya ARNyê bi kêmbûna rRNAyê ve digel amadekirina pirtûkxaneya RNA ya rêwerz pêk tê.
● Analîzkirina biyoinformatîk li ser bingeha lihevhatina bi genomek referansê
● Analîz îfadeya genê û DEG-ê lê di heman demê de avahiya transkriptê û analîza sRNA jî vedihewîne
●Kontrola Kalîteyê ya hişk: Em xalên kontrolê yên bingehîn di hemî qonaxan de bicîh dikin, ji amadekirina nimûne û pirtûkxaneyê bigire heya rêzkirin û biyoinformatics. Vê çavdêriya berbiçav peydakirina encamên domdar ên bi kalîte misoger dike.
●Daneyên Rêzkirina Strand-taybet: ji ber ku amadekirina pirtûkxaneya RNA rêwerz e, rê dide nasîna transkrîptên dijî-hesse.
●Analîzek Tevahî Ji Transkriptomên Prokaryotî re hatî çêkirin: lûleya biyoinformatîk ne tenê analîza vegotina genê lê di heman demê de analîza strukturên transkrîptê jî dihewîne, di nav de nasnameya operon, UTR û promotoran jî. Ew di heman demê de analîzkirina sRNAyan, ango şîrovekirin û pêşbînkirina struktur û armancên duyemîn jî vedihewîne.
●Piştgiriya Post-Firotinê: pabendbûna me ji temamkirina projeyê bi serdemek karûbarê piştî firotanê ya 3-mehî dirêj dibe. Di vê demê de, em şopandina projeyê, arîkariya çareserkirina pirsgirêkan, û danişînên Q&A pêşkêşî dikin da ku pirsên ku bi encaman ve girêdayî ne çareser bikin.
Pirtûkxane | Stratejiya rêzgirtinê | Daneyên pêşniyar kirin | Kontrola Kalîteyê |
Pirtûkxaneya rênîşander a rRNA hilweşiya | Illumina PE150 | 1-2 Gb | Q30≥85% |
Pevçûn (ng/μl) | Mîqdar (μg) | Paqijiyê | Linavketinî |
≥ 50 | ≥ 1 | OD260/280=1,8-2,0 OD260/230=1.0-2.5 Li ser gêlê bi proteîn an ADN-ê bi sînorkirî an tune. | RIN≥6.5 |
Konteyner: 2 ml lûleya santrîfujê (Polê tin nayê pêşniyar kirin)
Etîketkirina nimûneyê: Kom+kobar, mînak A1, A2, A3; B1, B2, B3.
Barkirin:
1. Qeşaya hişk: Pêdivî ye ku nimûne di torbeyan de bêne pakkirin û di qeşa hişk de bêne veşartin.
2. Tîpên RNAstable: Nimûneyên RNA dikarin di lûleya stabîlîzasyona RNA de bêne hişk kirin (mînak RNAstable®) û di germahiya odeyê de bêne şandin.
Analîza jêrîn vedihewîne:
● Kontrolkirina kalîteya daneya xam
● Lihevkirina bi genomê referansê
● Nirxandina Qalîteya Pirtûkxaneyê: Tesadufîbûna perçebûna RNA, mezinahiya têxê û têrbûna rêzikan
● Şîrovekirina fonksiyonel a genên kodkirina pêşbînîkirî
● Analîzkirina Derbirînê: Têkilî û Analîza Pêkhateya Sereke (PCA)
● Îfadeya Genê Ciyawaz (DEG)
● Şîrovekirina fonksiyonel û dewlemendkirina DEG-an
● Analîza sRNA: pêşbînkirin, şîrovekirin, armanc û pêşbîniya avahiya duyemîn
● Analîzkirina Struktura Transkrîptê: operon, pozîsyonên destpêk û dawî, herêma newergerandî (UTS), promotor, û analîza SNP/InDel
Saturation Sequencing
Şîrovekirina fonksiyonê ya genên kodkirinê
Têkiliya di navbera nimûneyan de
Analîzkirina Genên Derbirkirî yên Cûdahî (DEG).
Analîza dewlemendkirina fonksiyonel
annotation sRNA
Di vê weşana taybetmendiyê de pêşkeftinên ku ji hêla karûbarên rêzgirtina mRNA-ya tev-dirêj a Nanopore ya BMKGene ve hatî hêsan kirin bigerin.
Guan, CP et al. (2018) 'Guhertinên Transkrîptoma Gerdûnî ya Staphylococcus epidermidis-Damezrandina Biyofilm ku Bersiva Bi tevahî Alkaloidên Sophorea alopecuroides',Polonî Journal of Microbiology, 67(2), r. 223. doi: 10.21307 / PJM-2018-024.