Pengasingan inti diraih nganti 10 × Sistem Genomic ×, sing kalebu sistem microfluidics wolung saluran kanthi nyabrang dobel. Ing sistem iki, manik-manik gel karo barcode lan primer, enzim lan inti tunggal yaiku encapsulated ing lenga minyak ukuran nanoliter-in-emulition (permata). Sawise permata dibentuk, sel lysis lan ngeculake barcodes ditindakake ing saben permata. MRNA reparsa diterusake menyang molekul CDNA kanthi 10 × BARCODES lan UMI, sing luwih tundhuk karo konsultasi perprestah perpustakaan standar.
● Preparation penundaan tunggal-inuktif saka jaringan beku
● pembentukan gel manik-in-emulsion (permata) sing diikuti karo sintesis CDNA
● Saben manik ing permata dimuat karo primer dumadi saka 4 bagean:
Buntut Poly (DT) kanggo Sintesis MRNA,
Pengenal molekir unik (UMI) kanggo mbenerake bias amplifikasi
10x BARCOGE
Urutan naleni saka sebagean maca 1 SEquencing Primer
Sequencing RNA-nukleus Spreivers Cirge Watesan RNA-sel RNA tunggal, Ngaktifake:
● Panganggone conto conto beku lan ora mung diwatesi kanggo conto seger
● kurang saka sel beku sing kurang yen dibandhingake perawatan enzim ing sel seger, dibayangke ing data transkriptome ing bentuk gen sing kurang stres
● Ora perlu sadurunge mbusak sel getih abang
● diameter cell tanpa watesan
● Gedhe jumlah conto sing layak kanggo analisa, kalebu jinis jaringan kompleks lan ringkih sing rawan kanggo clumping cell utawa karusakan nalika jaringan dissociation
Cell / Tissue | Alesan |
Unfresh jaringan beku | Ora bisa entuk organisasi sing seger utawa dawa |
Sel Otot, MegakaroCyte, Lemak ... | Diameter sel amba banget kanggo mlebu instrumen kasebut |
Ati ... | Ringkes banget kanggo ngilangi, ora bisa mbedakake sel siji |
Sel Neuron, Otak ... | Luwih sensitif, gampang stres, bakal ngganti asil urutan |
Pancreas, Tiroid ... | Sugih enzim endogenous, sing mengaruhi produksi penundaan sel siji |
Tunggal-inti | Sel siji-sel |
Diameter sel tanpa watesan | Diameter Sel: 10-40 μm |
Bahan bisa dadi jaringan beku | Bahan kasebut kudu dadi jaringan seger |
Stres kurang saka sel beku | Perawatan enzim bisa nyebabake reaksi stres sel |
Ora ana sel getih abang sing kudu dicopot | Sel getih abang kudu dicopot |
Nuklir nyatakake bioinformasi | Seltone sel nuduhake bioinformasi |
Syarat conto | Perpustakaan | Strategi Sequencing | Data Disaranake | Kontrol Kualitas |
Jaringan kewan ≥ 200 mg Jaringan tanduran ≥ 400 mg | 10x Genomics SN CDNA Pustaka | Illumina PE150 | 100k PE maca saben sel (100-200 GB) | 700-1200 inti / μL lan integritas Nuklei diamati ing mikroskop |
Kanggo katrangan lengkap babagan tuntunan persiapan lan alur kerja persiyapan, mangga bebas ngobrol karo aBmkgene ahli
Kalebu analisis ing ngisor iki:
● Kontrol Kualitas: Nomer sel, deteksi gen, identifikasi sel akurat, molekul rna lan kuantifitas ekspresi
● Analisis sampel njero:
Cell Clustering lan Sonotasi Kluster
Analisis ekspresi diferensial: identifikasi degs ing kluster
Annotasi fungsi lan pengeluaran kluster degs
● Analisis antarmer-grup:
Kombinasi data
Analisis ekspresi diferensial: identifikasi degs ing kelompok
Annotasi fungsi lan pengeluaran klompok degs
● Analisis majeng:
Analisis Siklus Sel
Analisis pseudotime
Analisis komunikasi sel (ColphonedB)
Analisis Pemayaan Gene (GSEA)
Analisis sampel-sampel
Clustering Cell:
Analisis Kontribusi Bedan: Kluster DGS
Analisis Inter-Grosir
Analisis Kontrit Diferensial: Group DGS
Analisis majeng:
Analisis Pseudotime:
Analyisan Siklus Cell:
Jelajahi kemajuan sing digampangake dening Layanan Sequencing RNA Tunggal Bmkgene kanthi 10x kromium ing publikasi sing ditampilake:
Wang, L. et al. (2021) 'Analisis transkriptomik tunggal-sel mbukak lanskap paru-paru ing steroid-tahan exacerbation',Proses Akademi Ilmu Nasional Nasional Amerika Serikat, 118 (2), p. e2005590118. DOI: 10.1073 / pnas.2005590118
Zheng, H. et al. (2022) 'Jaringan Regulasi global kanggo ekspresi gen dyregulated lan tandha metabolik sing ora normal ing sel kekebalan ing penyakit microenvironment saka kuburan lan tiroiditis Hashimoto',Frontier ing Imunologi, 13, p. 879824. Doi: 10.3389 / fimmu.2022.879824 / BIBTEX.
Tian, H. et al. (2023) Transcriptome-sel Heterogeneitas lan Tanggapan Kekebalan Leukosites Sawise vaksinasi karo Edwardsiella Tarda sing ora aktif ing Flounder (ParaliaChthy Olivaceus) ',Akuakultur, 566, p. 739238. Doi: 10.1016 / J.Aquapulture.2023.739238.
YU, Y. et al. (2023) 'Therasi Photodinamik Mbenakake Asil saka Inhibitor Priksa Imun Via Ngatur Kekebalan Anti-Tumor ing Pasien Kanthi Kanker Gastric',Kanker Gastric, 26 (5), PP. 798-813. DOI: 10.1007 / S10120-023-01409-X / metrik.