Takagi et al。、The Plant Journal、2013
●正確なローカリゼーション:バックグラウンドノイズを最小限に抑えるために、30+30〜200+200個の個体とバルクを混合します。非同義の突然変異体ベースの候補地域予測。
●包括的な分析:NR、SWISSPROT、GO、KEGG、COG、KOGなどを含む、詳細な候補遺伝子機能注釈。
●ターンアラウンド時間の短縮:45営業日以内の迅速な遺伝子局在。
●豊富な経験:BMKは、作物、水生製品、森林、花、果物などの多様な種をカバーする数千の特性のローカリゼーションに貢献しています。
人口:
対立する表現型を持つ親の子孫を分離します。
たとえば、F2子孫、バッククロス(BC)、組換え近交系(RIL)
ミキシングプール
定性的特性の場合:30〜50人(最小20)/バルク
定量的なトラチスの場合:人口全体に極端な表現型のいずれかを持つ上位5%から10%の個人(最低30+30)。
推奨シーケンス深度
少なくとも20倍/親と1x/子孫の個人(たとえば、30+30個の個人の子孫ミキシングプールの場合、シーケンスの深さはバルクあたり30倍になります)
●全ゲノムの再配置
●データ処理
●SNP/インデルの呼び出し
●候補地域のスクリーニング
●候補遺伝子機能注釈
ヌクレオチド:
GDNAサンプル | 組織サンプル |
濃度:≥30ng/μL | 植物:1-2 g |
量:≥2μg(Volumn≥15μL) | 動物:0.5-1 g |
純度:OD260/280 = 1.6-2.5 | 全血:1.5 ml |
1.候補地域を特定するためのユークリッド距離(ED)に基づいて分類分析。次の図で
X軸:染色体番号。各ドットは、SNPのED値を表します。黒い線は、フィットしたED値に対応しています。より高いED値は、サイトと表現型との間のより重要な関連性を示しています。赤いダッシュラインは、重要な関連性のしきい値を表します。
2. SNP-Indexなしに基づいたアソシエーション分析
X軸:染色体番号。各ドットはSNP-Index値を表します。ブラックラインは、フィットしたSNPインデックス値を表しています。値が大きいほど、関連性はより重要です。
BMKケース
主要な効果の定量的特性遺伝子座FNL7.1は、キュウリの果実頸部長に関連する豊富なタンパク質をエンコードします
公開: Plant Biotechnology Journal、2020
シーケンス戦略:
両親(JIN5-508、YN):34倍と20xの全ゲノムの表現。
DNAプール(50個のロングネックと50個の短編):61×および52×の再標準
重要な結果
この研究では、個体群(F2およびF2:3)の分離は、ロングネックキュウリ線JIN5-508と短編YNを横切ることにより生成されました。 2つのDNAプールは、50人の極端な長所の個人と50人の極端な短首の個人によって構築されました。 BSA分析と従来のQTLマッピングにより、Major-Effect QTLがCHR07で特定されました。候補領域は、細かいマッピング、遺伝子発現の定量化、トランスジェニック実験によりさらに絞り込まれ、首長CSFNL7.1の制御における重要な遺伝子が明らかになりました。さらに、CSFNL7.1プロモーター領域の多型は、対応する発現と関連していることがわかりました。さらなる系統解析により、FNL7.1遺伝子座はインドから発生する可能性が非常に高いことが示唆されました。
![]() キュウリの首の長さに関連する候補地域を特定するためのBSA分析でのQTLマッピング | ![]() CHR07で特定されたキュウリネックレングスQTLのLODプロファイル |
Xu、X.、et al。 「主要な効果の定量的特性遺伝子座FNL7.1は、キュウリの果実の首の長さに関連する後期胚形成豊富なタンパク質をコードします。」 Plant Biotechnology Journal 18.7(2020)。