Single- Nuclei RNA sequenza
Schema tecnica
L'isolazione di Nuuclei hè ottenutu da 10 × genomiche cromaid ™, chì consiste ottu channel microfluidics cù doppia passate. In questu sistema, una foni di gel cù barcodi è primer, enziliezioni per un solu nuvole è sfenzu munzicu-size, generendu gel Bead-in-emullion (Gem). Una volta gemma sò furmate, liscia di cellula è a liberazione di i barcodi sò realizati in ogni gemma. MrNA sò invercritte in e molécule di CDNA cù 10 × barcodi è amichi, chì sò in sughjettivi a custruzione di a biblioteca standard.
Caratteristiche
● A preparazione di sospensjoni singuli di nuclei da i tessuti congelati
● Formazione di l'equilibri di gel (Gem) seguita da SYPHESIS CDAD
● Ogni perla in una gemma hè carricata da i primi cumposti di 4 sezioni:
cola poli (dt) per u mrna primica è sintesi di cdna,
Identificatore di Moleculari unicu (Umi) per corriggerà a BIAS di Amplification
10x barcode
Sequenza di ligame di lettura parziale 1 primer sequenzione
VITANTI
Un single-nucleus rna dra ricenzie circumvENTI A LIMIZIONE DI RAGENZA UNACE CILETA, ABILITION:
● L'usu di mostri congelati è micca solu limitati à mostri freschi
● U stress bassu di e cellule congelate quandu cumparatu à u trattamentu enzimaticu di e cellule fresche, riflette in i dati trascritti in a forma di geni indettati menu stress
● Ùn ci hè bisognu di rimuzione previa di i globuli rossi
● diametru di cellula illimitata
● Grande array di mostri chì sò eligibili per l'analisi, cumprese i tipi di tessuti cumplessi è fragili è di a cellula à a cellula o a distruzzione di i tessuti
SAMPLES chì ùn ponu micca esse analizati da a sequenza Cell-Cell-Cell è sò eligibili per Single Nuclei RNA Sequening:
| Cell / Tessulu | Motivu |
| Tessuti frunti | Impossibile uttene organizzazioni fresche o longa |
| Cellula di u musculu, Megakaryocyte, Gratu ... | U diametru cellulare hè troppu grande per inserisce u strumentu |
| Liver ... | Troppu fragile per rompe, incapace di distinguerà e cellule singole |
| Cellu di Neuron, u cervellu ... | Più sensibile, faciule à u stress, cambierà i risultati di sequenza |
| Pancreas, Piroide ... | Ricchi in enzimi endogeni, affettendu a produzzione di sospensione chilare sola |
Unica-nucleu vs unicu cellule
| Sola-nucleus | Cellula sola |
| Diametru cellulare illimitatu | Diametru cellulare: 10-40 μm |
| U materiale pò esse tessuti congelati | U materiale deve esse tessulu frescu |
| Stress bassu di e cellule congelate | U trattamentu Enzyme pò causà a reazione di u stress di a cellula |
| Nisuna globuli rossi anu bisognu à esse cacciatu | I gesti di sangue rossi anu da esse cacciatu |
| Nucleare spressione bioinformazione | A cellula completa spressione a bioinformazione |
Specificazioni
| Esigenze di mostra | Biblioteca | Strategia Sequencing | Dati cunsigliati | Cuntrollu di qualità |
| Tessulu animale ≥ 200 mg Tessuto pianta ≥ 400 mg | 10x genomici sn cdna library | Illuminata Pime50 | 100k pe leghje per cellula (100-200 gb) | 700-1200 nuclei / μL è integrità nuclei osservatu in microscope |
Per più dettagli nantu à a Previera di Preparazione di a Preparazione è serviziu di u serviziu Sample, per piacè sentite liberu di parlà à unEspertu bmkgene
U flussu di travagliu di serviziu
Include l'analisi di seguente:
● Control di qualità: numeru di cellule, rilevazione di genu, l'identificazione precisa di e ceciali, a moleculche è quistizione di espressione
● Analisi di mostra interna:
Annotazione di u cluster è u cluster cellulare
Analisi di spressione differenziali: identificazione di edi in clusters
Annotazione funzionale è arricchimentu di e deg di cluster
● Analisi inter-Gruppu:
Cumminazione di dati
Analisi di Spressione Diferenziale: Identificazione di edi in gruppi
Annotazione funzionale è arricchimentu di e degre di u gruppu
● analisi avanzata:
Analisi di ciclu cellule
Analisi Pseudotime
Analisi di Comunicazione Cellulare (CellphonDeB)
Gene stabilisce l'analisi di archiglia (GSEEA)
Analisi interni
Clustering Cell:
Analisi di spressione differenziali: deg cluster
Analisi Inter-Gruppu
Analisi di spressione differenziali: Degs di u gruppu
Analisi Avanzata:
Analsi Pseudotime:
Analisi di cicatrici di cellule:
Esplora i avanzatori facilitati da un singulu singleu di BMKGENE RNA SERVIZI DI SEQUENZING BY 10X CHROMIUM IN Sti Publicazioni Fised:
WANG, L. et al. L'analisi trascrittomica di u 2021) revela u paisaghju immune di Lung in Logog in a sterata-resistente aSHMACSABABABABABTION ',Prucedura di l'Academia Naziunale di Scienze di i Stati Uniti d'America, 118 (2), p. E2005590118. DOI: 10.1073 / PNAS.2005590118
Zheng, H. et al. (2022) 'una reta regulatoria ghobale per l'espressione di gene genu è anormale in i celluli metabolichi in u microenVirente di a triodia di u tombu è di The Hashimoto',Fruntieri in imunologia, 13, p. 879824. Doi: 10.3389 / Fimmu.2022.879824 / Bibtex.
Tian, H. et al. (2023) "Unica sulu currughjita (rispose immune di Leukocicy dopu a vaccina cun Vaccina cù Edmibiella Targa in Flotichtor (paralichtori Olivaceus) ',ATTIULULTURA, 566, p. 739238. Doi: 10.1016 / J.QUACULTURE.2023.739238.
Yu, y. et al. (2023) "terapia fotodinramica si migliurà l'inhibiori di u cuntrollu immunicu via l'immunità ant-tumoding in i pazienti cù u cancer di gastricu ',Cancru Gastr, 26 (5), PP. 798-813. DOI: 10.1007 / S10120-023-01409-X / Metrica.
