● Pagkuha sa poly-A mRNA nga gisundan sa cDNA synthesis ug pag-andam sa librarya
● Pagsunud-sunod sa tibuuk nga mga transcript
● Bioinformatic analysis base sa pag-align sa usa ka reference genome
● Ang bioinformatic analysis naglakip dili lamang sa ekspresyon sa gene ug isoform-level kondili sa pagtuki usab sa lncRNA, gene fusions, poly-adenylation ug gene structure
●Pag-ihap sa ekspresyon sa lebel sa isoform: makapahimo sa detalyado ug tukma nga pagtuki sa ekspresyon, pagpadayag sa pagbag-o nga mahimong matabonan sa dihang mag-analisar sa tibuok gene nga ekspresyon
●Gipamubu nga mga Panginahanglan sa Data:Kung itandi sa Next-Generation Sequencing (NGS), ang Nanopore sequencing nagpakita sa ubos nga mga kinahanglanon sa datos, nga nagtugot alang sa katumbas nga lebel sa gene expression quantification saturation nga adunay mas gamay nga datos.
●Mas taas nga katukma sa pag-quantification sa ekspresyon: pareho sa lebel sa gene ug isoform
●Pag-ila sa dugang nga transcriptomic nga impormasyon: alternatibong polyadenylation, fusion genes ug lcnRNA ug ang ilang target nga mga gene
●Lapad nga Eksperto: Ang among team nagdala og daghang kasinatian sa matag proyekto, nga nakakompleto sa 850 Nanopore full-length transcriptome nga mga proyekto ug nagproseso sa kapin sa 8,000 ka mga sample.
●Suporta sa Post-Sales: ang among pasalig molapas pa sa pagkompleto sa proyekto nga adunay 3 ka bulan nga human sa pagbaligya nga panahon sa serbisyo. Niining panahona, nagtanyag kami nga pag-follow-up sa proyekto, tabang sa pag-troubleshoot, ug mga sesyon sa Q&A aron matubag ang bisan unsang mga pangutana nga may kalabotan sa mga resulta.
Library | Estratehiya sa pagkasunodsunod | Girekomenda ang datos | Pagkontrol sa Kalidad |
Poly A gipadato | Illumina PE150 | 6/12 Gb | Average nga marka sa kalidad: Q10 |
Conc.(ng/μl) | Gidaghanon (μg) | Kaputli | Integridad |
≥ 100 | ≥ 1.0 | OD260/280=1.7-2.5 OD260/230=0.5-2.5 Limitado o walay kontaminasyon sa protina o DNA nga gipakita sa gel. | Para sa mga tanom: RIN≥7.0; Para sa mga mananap: RIN≥7.5; 5.0≥28S/18S≥1.0; limitado o walay baseline elevation |
● Mga tanom:
Root, Stem o Petal: 450 mg
Dahon o Binhi: 300 mg
Mga prutas: 1.2 g
● Hayop:
Kasingkasing o Tinai: 300 mg
Viscera o Utok: 240 mg
Kaunoran: 450 mg
Mga bukog, Buhok o Panit: 1g
● Mga Arthropod:
Mga insekto: 6g
Crustacea: 300 mg
● Tibuok dugo: 1 tubo
● Mga selula: 106 mga selula
Kontainer: 2 ml centrifuge tube (Tin foil dili girekomendar)
Sample nga pag-label: Grupo+kopya eg A1, A2, A3; B1, B2, B3.
pagpadala:
1. Dry-ice: Ang mga sample kinahanglang ibutang sa mga bag ug ilubong sa dry-ice.
2. RNAstable tubes: Ang mga sample sa RNA mahimong mamala sa RNA stabilization tube(eg RNAstable®) ug ipadala sa temperatura sa lawak.
● Hilaw nga pagproseso sa datos
● Transcript identification
● Alternatibong splicing
● Pagsukod sa ekspresyon sa lebel sa gene ug lebel sa isoform
● Pagtuki sa lain-laing ekspresyon
● Function annotation ug enrichment (DEGs ug DETs)
Alternatibong pagtuki sa splicing Alternatibong Polyadenylation Analysis (APA)
Pagtagna sa lncRNA
Anotasyon sa nobela nga mga gene
Clustering sa mga DET
Mga Network nga Protein-Protein sa mga DEG
Susihon ang mga pag-uswag nga gipadali sa Nanopore nga tibuuk nga serbisyo sa pagsunud sa mRNA sa BMKGene pinaagi sa usa ka curated nga koleksyon sa mga publikasyon.
Gong, B. et al. (2023) 'Epigenetic ug transcriptional activation sa secretory kinase FAM20C isip oncogene sa glioma', Journal of Genetics ug Genomics, 50 (6), pp. 422-433. doi: 10.1016/J.JGG.2023.01.008.
Siya, Z. et al. (2023) 'Full-length transcriptome sequencing of lymphocytes motubag sa IFN-γ nagpadayag sa Th1-skewed immune response sa flounder (Paralichthys olivaceus)', Fish & Shellfish Immunology, 134, p. 108636. doi: 10.1016/J.FSI.2023.108636.
Ma, Y. ug uban pa. (2023) 'Comparative analysis sa PacBio ug ONT RNA sequencing nga mga pamaagi alang sa Nemopilema Nomurai venom identification', Genomics, 115(6), p. 110709. doi: 10.1016/J.YGENO.2023.110709.
Yu, D. ug uban pa. (2023) 'Ang pagtuki sa Nano-seq nagpadayag sa lain-laing functional tendency tali sa mga exosome ug microvesicles nga nakuha gikan sa hUMSC', Stem Cell Research and Therapy, 14(1), pp. 1–13. doi: 10.1186/S13287-023-03491-5/TABLES/6.